Byly studovány rysy indukce geneze kalusu v kultuře Saussurea involucata a Saussurea saline. Byla provedena studie sterilizačních činidel (chlornan vápenatý, sublimát v různých koncentracích a ethylalkohol) a stanoven optimální režim pro získání aseptických sazenic ze sterilních semen. Vliv fytohormonální rovnováhy živné půdy, doby zavedení explantátů do in vitro kultury a typu explantátu (hypokotyl, kotyledonový list, pravý list, kořen) na indukci kalusogeneze v kultuře izolovaných orgánů v Saussurea involucrata Kar. et Kir. a Saussurea involucrata Kar. et Kir. (Saussurea salsa (Pall.) Spreng.). Ukázalo se, že maximální frekvence kalusogeneze u Saussurea involucrata Kar. et Kir. (až 65 %) bylo pozorováno při použití modifikovaného živného média Murashige a Skoog s přídavkem fytohormonů: 2 mg/l – IAA (kyselina ?-indolyloctová), 0,5 mg/l – BAP (6-benzylaminopurin). Pro kalusogenezi Saussurea salsa (Pall.). Spreng. nejvhodnější jsou (až 68 %): koncentrace fytohormonů 2 mg/l – IAA, 0,5 mg/l – BAP.
buněčná kultura
Saussurea involucrata Kar. et Kir.
saussurea salsa (pall.) spreng
1. Adekenov S.M. Eurasijský patent č. 023377 ze dne 31.05.2016. května XNUMX // Způsob výroby činidel proti giardióze a otiskhorchiáze ze Saussurea salsa (Pall.) Spreng.
2. Butenko R.G. Biologie buněk vyšších rostlin in vitro a biotechnologie na nich založené. – M.: FBK-PRESS, 1999. – 160 s.
3. Lipshits S.Yu. Rod Saussurea DC. (Asteraceae). – L.: Nauka, 1979. – 283 s.
4. Filatová N.S. Saussurea (Bitter) Saussurea DC. Ilustrovaný průvodce rostlinami Kazachstánu. – Alma-Ata: Science, 1972. – T. 2. – S. 397-404.
5. Chao-Lin Kuo, Dinesh-Chandra Agrawal, Hung-Chi Chang, Ya-Ting Chiu, Chu-Peng Huang, Yi-Lin Chen, Shih-Hung Huang a Hsin-Sheng Tsay. In vitro kultivace a produkce syringinu a rutinu v Saussurea involucrata Kar. et Kir. – ohrožená léčivá rostlina // Botanické studie. – sv. 56. – 2015. – S. 12-20.
6. Guo B., Gao., Liu CZ In vitro produkce ohrožené léčivé rostliny Saussurea involucrata Kar. et Kir. // Plant Cell Rep. – 2007. – Sv. 26. – S. 261-265.
7. Ma HP, Fan PC, Jing LL a kol. Antihypoxická aktivita v simulované vysoké nadmořské výšce byla izolována v petroletherovém extraktu Saussurea involucrata // Journal of Ethno pharmacology. – 2011. – Sv. 137(3). – S. 1510-15.
8. Parry ML, Canziani OF, Palutikof JP Změna klimatu: dopady, adaptace a zranitelnost. Příspěvek pracovní skupiny II ke čtvrtému hodnocení. Zpráva Mezivládního panelu pro změnu klimatu (IPCC). – Cambridge: Cambridge University Press, 2007. – 976 s.
9. Wai-I Chik, Lin Zhu, Lan-Lan Fan a kol. Saussurea involucrata: Přehled botaniky, fytochemie a etnofarmakologie vzácné tradiční bylinné medicíny // Journal of Ethno pharmacology. – 2015. – Sv. 172. – S. 44-60.
10. Way TD, Lee JC, Kuo DH a kol. Inhibice signalizace receptoru epidermálního růstového faktoru Saussurea involucrata, vzácná tradiční čínská léčivá bylina, v lidských hormonorezistentních buňkách rakoviny prostaty PC-3 // J. Agric. Food Chem. – 2010. – Sv. 58(6). – S. 3356-3365.
11. Yang J., Wang R., Liu L., Shi Y. Fytochemikálie a biologické aktivity druhů Saussurea // J. Asian Nat. Prod. Res. – 2010. – Sv. 12. – S. 162-175.
Zachování biodiverzity jako nezbytná podmínka stability biosféry je základním problémem moderní vědy. Proto existuje celosvětová poptávka po identifikaci a studiu ohrožených druhů a populací. Autonomní vlastnosti druhů omezují jejich konkurenceschopnost, objem základní ekologické niky a abundanci ve fytocenózách, a tím ovlivňují charakter jejich rozšíření. Vzácnost je vždy výsledkem interakce druhu s vnějším prostředím a je spojena s klimatickými podmínkami a krajinnými prvky, jakož i biotickými a antropogenními faktory prostředí [8].
Rod Saussurea DC. (Bitterbush, Saussurea) rodiny Asteraceae má asi 400 druhů, rozšířených v Eurasii a Severní Americe. Tento rod zahrnuje vytrvalé nebo méně často dvouleté byliny a zakrslé keře. Řada funkcí tvoří rod Saussurea DC. zajímavé ke studiu [3].
Ve Flóře Kazachstánu se vyskytuje 41 druhů rodu Saussurea DC., v Dzhungar Alatau 21 druhů, z nichž 6 je vzácných [4].
Saussurea zabalená Saussurea involucrata Kar. et Kir. velmi vzácný druh. Počet je všude nízký, vyskytuje se u jednotlivců nebo malých skupin. Roste v alpském pásu hor na skalnatých sutích, rýžovištích, mezi kameny. Vyskytuje se na skalnatých svazích alpského pásma a hor jihovýchodního Kazachstánu [4].
Čínští vědci získali buněčnou kulturu Saussurea involucrata Kar. et Kir. – zdroj řady sekundárních metabolitů s širokým spektrem biologické aktivity [5-7; 9-11].
Fytochemické a farmakologické studie extraktu z solného roztoku Saussurea (Saussurea salsa (Pall.) Spreng.), jako jeden z příbuzných druhů, rozšířený v Kazachstánu. Byl vyvinut experimentálně-průmyslový předpis pro výrobu bylinného léku „Sausalin“ z této rostliny, která má antiopisthorchiázu, antitrichomonádní a antiparazitární aktivitu [1]. Proto práce zaměřené na komplexní výzkum v podmínkách in Vitro potenciálně perspektivní druhy rostlin rodu Saussurea DC., je aktuální.
Účel Tato práce má studovat dva druhy rodu Saussurea DC.: Saussurea zabalená (Saussurea involucrata Kar. et Kir.) a saussurea fyziologický roztok (Saussurea salsa (Pall.) Spreng.) v podmínkách in Vitro.
Materiály a metody
Materiálem pro studii byla semena dvou druhů rodu Saussurea DC. (Bitterkusha, Saussurea); zabalený saussurea (Saussurea involucrata Kar. et Kir.) a saussurea fyziologický roztok (Saussurea salsa (Pall.) Spreng.). Jako explantáty byly použity 15-20denní sazenice pěstované za aseptických podmínek. Semena vybraná pro výsadbu byla předem sterilizována a vyseta do Petriho misek s agarovým substrátem. Jako sterilizační prostředky byly použity chlornan vápenatý, sublimát a ethylalkohol. Před sterilizací byla semena vyčištěna a namočena v 10% roztoku SDS (dodecylsulfát sodný) a poté byla třikrát promyta destilovanou vodou. V digestoři s laminárním prouděním se provádějí následující stupně sterilizace semen: ponoření semen do roztoku chlornanu vápenatého na 5 minut nebo do 0,1% roztoku sublimátu na 3 a 5 minut, 3x propláchnutí sterilní destilovanou vodou, ponoření semena v 80% etylalkoholu po dobu 5 sekund, odstranění alkoholu, sušení semen, pasivace semen. Výsledné aseptické sazenice byly rozděleny na segmenty a zasazeny na živné médium. Primární kalusy získané z aseptických semenáčků byly subkultivovány na modifikovaných živných médiích Murashige a Skoog doplněných IAA (kyselina β-indolyloctová), 6-BAP (6-benzylaminopurin). Růstový cyklus byl 30 dní. Jako kultivační nádoby byly použity Petriho misky 2×10 cm obsahující 20 ml živného média. Explantáty byly kultivovány při pokojové teplotě 23-25 °C na světle. Frekvence tvorby kalusu byla hodnocena v procentech podle počtu explantátů, které produkovaly kalus, z celkového počtu explantátů [2].
Výsledky a diskuse
Studie indukce kalusogeneze v kultuře aseptických semenáčků získaných ze semen Saussurea involucra ukázaly, že tento proces do značné míry závisí na podmínkách sterilizace, složení živného média a typu použitého explantátu.
Tabulky 1 a 2 uvádějí údaje o účinku sterilizačních činidel na klíčení Saussurea involucra a Saussurea solného roztoku. Byl stanoven stupeň infekce semen 6. den kultivace cizí infekcí a klíčivost semen po 28 dnech.
Vliv sterilizačních činidel na klíčení semen Saussurea involucra
