Číslo publikace RU2101914C1 RU2101914C1 RU95115720A RU95115720A RU2101914C1 RU 2101914 C1 RU2101914 C1 RU 2101914C1 RU 95115720C95115720 RU 95115720C95115720 RU 95115720C95115720 RU 2101914C1 RU2101914 A1 RU 2101914 1A RU 1995 A RU09 A RU 05A RU 95115720 C95115720 RU1995 C09 RU 05C1995 Autorita RU Rusko Klíčová slova zrno mycelium vodní substrát Datum dosavadního stavu techniky 09 -05-1998 Číslo přihlášky RU01A Jiné jazyky Angličtina ( en ) Jiné verze RU20A ( ru Vynálezce O.Yu. Kuznetsov Původní pověřenec Kuznetsov Oleg Yuvenalyevich Datum priority (Datum priority je předpoklad a nemá právní závěr Google. neprovedl právní analýzu a neručí za správnost uvedeného data.) 1995-09-05 Datum podání 1995-09-05 Datum zveřejnění 95115720 2101914-1-1997 Přihláška podaná Olegem Yuvenalievich Kuznetsovem Kritický Oleg Kuznetsov Yuvenalyevich 08-20-95115720 Priorita k RU95115720A priorita Kritický patent/RU1998C01/ru 20-1998-01 Publikace RU20A zveřejnění Kritický patent/RU2101914 udělený udělený patent/RU1A2101914ru1 CrXNUMX XNUMX-XNUMX-XNUMX Zveřejnění Publikace RUXNUMX XNUMXCXNUMX Kritický patent/RUXNUMXCXNUMX/ru
Abstraktní
Použití: zemědělství a biotechnologie, zejména pěstování hub. Podstata vynálezu: pro pěstování obilného mycelia vyšších hub se substrát připraví smícháním zrna s vodou, umístěním do nádoby s hrdlem, uchováváním 121 hodin a následnou inkubací po odstranění přebytečné vody přes další 1 hodin, přidání přísad a sterilizace při 2,0 o C, tlaku 2,5 atm po dobu XNUMX – XNUMX hodiny, přičemž před sterilizací se hrdlo nádoby uzavře hliníkovou fólií a po sterilizaci se substrát protřepe.
Popis
Vynález se týká biotechnologie, konkrétně způsobů přípravy obilného mycelia hub pro následné použití při pěstování plodnic těchto hub.
Je známý způsob výroby živných médií v pevné fázi z obilných zrn pro pěstování hub (Ivanov L.F. a kol. A.S. N 1191463, 1985). Podstatou metody je, že živná půda obsahující obilná zrna o vlhkosti 12-20% se předehřeje na 180-260 o C po dobu 2-10 minut a poté prudce ochladí na 30-40 o C proudem sterilní vzduch nasycený vodou.pára o relativní vlhkosti 92-98%, poté médium sterilizujeme 15-20 minut při teplotě 115-120 o C, ochladíme na 30-40 o C, dodatečně zvlhčíme sterilní vodou do vlhkost 60-62% a naočkováno semenným materiálem v množství 2-5% původního vzduchosuchého prostředí.
Nevýhodou této metody je její značná pracnost, nutnost použití složitých drahých zařízení a technologická náročnost procházení etapami této metody, což výrazně zvyšuje náklady na materiál.
Známý je také způsob výroby obilného mycelia pomocí technologie kapalné inokulace (Stamets P. 1993), což je kombinace kapalné fermentace podhoubí a tradiční „zrnové“ metody výroby mycelia. Zpočátku se akumuluje čistá fermentační kultura houbového mycelia s následným výsevem do sterilního zrna. Výhodou této metody je rychlost získání velkého množství mateřského mycelia.
Nevýhodou této metody je, že vyžaduje speciální drahé vybavení, vysokou kvalifikaci a dovednosti pracovních specialistů, a to nepochybně zvyšuje náklady na výsledné obilné mycelium. Další nevýhodou je, že i přes rychlost získaného výchozího semenného materiálu (4-7 dní) vlastně nahrazuje pouze výchozí mateřskou kulturu mycelia z Petriho misek nebo zkumavek se šikmým agarem a následné fáze práce jsou obdobné jako např. ty pro následnou produkci mycelia zrn I, II a III generace.
Jako prototyp byla zvolena metoda přípravy zrnového podhoubí vyšších hub podle Lemke G. (1972), kde příprava podhoubí probíhá postupně v následujících fázích:
1. Na 10 kg pšeničného zrna přidejte 15 litrů vody, směs vařte 15 – 20 minut na mírném ohni.
2. Voda po převaření se scedí přes síto, zrno se „povrchně“ vysuší, poté se přidá 120 g sádry a 30 g křídy. Tyto přísady regulují hodnotu pH média a působí jako pufr, sádra také zabraňuje slepování zrna.
3. Obilí se nasype do 1-litrových mléčných lahví a naplní je do 2/3. Nádoby se uzavřou vatovými zátkami a sterilizují při teplotě 121 °C a tlaku 101,325 kPa po dobu 1,5 hodiny. Po autoklávování je pH média 6,5 - 6,7.
4. Substrát se ochladí na výsevní teplotu 24–26 o C.
5. Inokulace se provádí sterilním mateřským myceliem pěstovaným ve zkumavkách na agarovém médiu. K naočkování jedné lahvičky (nádoby) použijte jednu zkumavku s královským myceliem.
6. Po vysetí podhoubí se lahve inkubují v termostatu při teplotě 24-26 o C, po 3 dnech se kontroluje nepřítomnost konkurenční mikroflóry.
7. 7-10 dní po vysetí mycelia na obilný substrát se obsah nádob protřepe. To zabraňuje slepování zrna a urychluje růst mycelia.
8. 3-4 týdny po výsevu je mycelium připraveno k použití.
9. Před výsevem zcela vyklíčené mycelium uchováváme v chladničce při teplotě 2-4 o C.
Nevýhody této metody jsou vysoké a nepředvídatelné odmítnutí z nasazené dávky nádob (v průměru 20-40 % a někdy až 60 %) v důsledku poškození zrna v nich nižšími houbami po průchodu výše popsanými stupni podle až Lemke G., což v konečném důsledku vede ke značným ztrátám použitých obilovin, k jejich opakované sterilizaci za účelem zničení vyvinutých plísní, a tudíž vyžaduje značné mzdové náklady.
Navržený způsob pěstování mycelia zrn vyšších hub je implementován následovně:
1. Suché obilí se balí do nádob do 2/3 jejich využitelného objemu.
2. Nádoby s obilím se plní vodou tak, aby voda sahala k okrajům nádob cca 8-10 cm, protože když suché obilí nabobtná, zvětší svůj objem asi jedenapůlkrát.
3. Nádoby s obilím necháme 24 hodin namočit zrno a iniciovat klíčení spor nižších hub, tzn. přechod z klidového stavu do vegetativní fáze vývoje. Po této době nebo později (je možné zpoždění 6–8 hodin) se voda z nádob scedí a zrno se v nádobách ponechá vlhké další den. V této fázi lze v případě potřeby přidat různé kompozitní přísady, například křídu a sádru. Po přidání těchto přísad se každá nádoba protřepe a přísady se rovnoměrně rozmístí po celém objemu nádoby a hrdlo nádoby se zakryje hliníkovou fólií.
Zrno v nádobách před autoklávováním by tedy mělo být uchováno celkem 48 hodin ve dvou fázích: vodná fáze (namáčení zrna v nádobách) po dobu 24 hodin a mokrá fáze (voda odstraněna z nádob a zrno je tam inkubován další den) 24 hodin.
4. Nádoby se umístí do autoklávu a sterilizují se při teplotě 121 o C, tlaku 1 atm (101,325 kPa) a době sterilizace 2-2,5 hodiny v závislosti na objemu zrna ke sterilizaci v nádobách. (určeno experimentálně).
5. Nádoby s obilím se ochladí na pokojovou teplotu a poté se naočkují královským myceliem na husté agarové živné médium z „cukrových“ zkumavek nebo Petriho misek.
6. Po vysetí se nádoby inkubují v termostatu při teplotě 24 – 26 o C nebo při pokojové teplotě ve speciálních místnostech na stojanech.
7. Po 7-10 dnech se nádoby s naklíčeným myceliem protřepou, aby se zabránilo slepení zrna a aktivoval se růst mycelia. Tuto fázi lze kombinovat s přebalováním obilí z kontejnerů do plastových sáčků. Sáčky jsou pevně zabaleny a na několika místech se propíchnou sterilní jehlou, aby se udržela výměna plynu mezi vnitřní nádobou sáčku, kde se nachází rostoucí mycelium na zrnech, s okolím. Balíčky se pak vloží do lednice s teplotou 2-4 o C. V důsledku vývoje mycelia na zrnu dochází ve hmotě mycelia k samoohřevu na 24-26 o C, a proto jsou podmínky chladnička nepůsobí inhibičně na rostoucí mycelium a postupně pokrývá všechna zrna obalu, tvoří se kondenzace a vytváří potřebnou vlhkost.
8. Konečná připravenost mycelia se zjišťuje vizuálně, mycelium roste a spojuje zrna dohromady do jediné pevné bílé brikety. Před výsevem do hmoty připraveného substrátu se mycelium dále skladuje v chladničce při stejné teplotě 2–4 °C.
Použití tohoto způsobu pěstování obilného mycelia umožňuje získat 99-100% výnos vyrobeného obilného mycelia v samostatných dávkách, aniž by došlo k jeho poškození ve stádiích růstu nižšími houbami, v důsledku provokujícího uvolňování těchto hub z stabilní klidový stav – spory před fází autoklávování zrna, což vede k zaručenému poškození vegetativních forem nižších hub.
Nároky (1)
Způsob pěstování obilného mycelia vyšších hub, zahrnující přípravu substrátu smícháním zrna s vodou, odstranění přebytečné vody, přidání přísad, sterilizaci s následným protřepáním, vyznačující se tím, že zrno se po smíchání s vodou vloží do nádoby s hrdlem. , zrno se uchovává 121 hodin a po odstranění přebytečné vody se inkubuje další den a před sterilizací se hrdlo nádoby uzavře hliníkovou fólií, sterilizuje při 1 o C a tlaku 2,0 atm 2,5 -XNUMX hodiny.
RU95115720A 1995-09-05 1995-09-05 Způsob přípravy obilného mycelia vyšších hub RU2101914C1 (ru)
Prioritní aplikace (1)
| Číslo žádosti | Důležité datum | Datum podání | Titul |
|---|---|---|---|
| RU95115720A RU2101914C1 (ru) | 1995-09-05 | 1995-09-05 | Způsob přípravy obilného mycelia vyšších hub |
Aplikace nárokující si prioritu (1)
| Číslo žádosti | Důležité datum | Datum podání | Titul |
|---|---|---|---|
| RU95115720A RU2101914C1 (ru) | 1995-09-05 | 1995-09-05 | Způsob přípravy obilného mycelia vyšších hub |
Publikace (2)
| Číslo publikace | Datum publikace |
|---|---|
| RU95115720A RU95115720A (ru) | 1997-08-20 |
| RU2101914C1 pravda RU2101914C1 (ru) | 1998-01-20 |
Když máte k dispozici alespoň jednu sklenici kolonizovaného obilí, pak máte štěstí a skvělou práci!
Tuto jednu zavařovací sklenici ostatně snadno rozmnožíte a uděláte z ní 3-5 nebo dokonce 7 stejných sklenic s obilným myceliem. Velmi zhruba to lze přirovnat k pučení nebo množení výhonky v rostlinách.
Uvažujme o jedné z účinných metod očkování a množení mycelia – přenos zrna na zrno nebo přenos zrna na zrno (anglicky – grain to grain transfer nebo G2G).
❇️ Metoda je vhodná pro všechny druhy hub, pro které se jako primární substrát používá obilí: jak pro houby psi, tak pro ježka česaného (hericium hřeben).
Výhody přenosu zrna na zrno
(Tj. Snadno. Metoda „grain to grain“ neboli, jak říkají Američané, „grain2grain“ je tak jednoduchá, že ji zvládne každý začátečník.
(Tj. Rychlost. Po naočkování sterilních zrn touto metodou roste mycelium mnohem rychleji než při inokulaci tekutou suspenzí spor.
(Tj. Jednoduchost. Tato metoda je také dobrá pro ty, kteří ještě nejsou připraveni zahájit pracnější postup přípravy tekuté kultury. A pokud jde o rychlost kolonizace, přenos zrna na zrno není horší než očkování tekutým myceliem.
(Tj. Zvyšuje šance na úspěch a produktivitu. Začínající pěstitelé se často potýkají s tím, že celý tisk výtrusů a celou suspenzi výtrusů okamžitě utratili na 10-20 sklenicích a nakonec získali jen jednu nebo dvě úspěšné.
✅ A co nováčci! Tuto metodu s úspěchem používají i pokročilí pěstitelé. Přeci jen jde o obrovskou úsporu času a minimum úkonů.
(Tj. Téměř nekonečná metoda množení mycelia. Tímto způsobem můžete provést více než jeden přenos mycelia na čerstvé sterilní zrno.
Jak provést očkování zrna na zrno
1️⃣ Připravte si sklenice s čerstvým sterilním obilným substrátem: pšenice, oves, ječmen, hnědá rýže, žito, popcorn, běžná kukuřice, proso, čirok, ptačí semeno.
Chlazený obilný substrát po sterilizaci pro inokulaci obilným myceliem
Je vhodné naplnit sklenice obilím maximálně o 50–60 %, aby zbylo místo pro kolonizovaná zrna, která přidáte na vršek sklenic.
2️⃣ Pamatujte na sterilitu! Před prováděním následných procedur používáme rukavice, masku, čepici, plášť/pláštěnku pro domácí mazlíčky.
Vybavení pěstitele: rukavice, maska, župan
3️⃣ Vyberte si sklenici se sněhově bílým myceliem. Zkontrolujte, zda neobsahuje plísně, dusík a metabolity. Vhodné pro tuto metodu očkování: výjimečně zdravé dokonalé mycelium. Ošetřete sklenici alkoholem.
Sklenice s myceliem a připravené sklenice se sterilním obilným substrátem důkladně vytřete alkoholem
4️⃣ Rozbijte zrno ve sklenici s kolonizovaným obilným substrátem bez otevření víka. Vezměte sklenici a metodicky na ni ze všech stran poklepejte dlaní a dobře ji protřete. Musíte zajistit, aby se shluk obilného mycelia rozpadl na jednotlivá zrna nebo menší shluky zrn.
Rozdrťte mycelium obilí ve sklenici
5️⃣ Povrch stolu, na kterém budete manipulovat, ošetřete alkoholem.
Pokud máte ve svém arzenálu křemennou lampu, použijte ji k dezinfekci místnosti po dobu 30 minut před zahájením manipulací.
Ideálně použít SAB (stálý vzduch box), hlavní box nebo laminární proudění.
Pokud to není možné, pak lze přesun provést v co nejčistší místnosti na stole ošetřeném alkoholem nebo nad otevřeným víkem maximálně vyhřáté trouby pod proudem horkého vzduchu.
Zkušenosti Shroomok: Při manipulaci ve volném prostoru se plísní nakazí 1-2 sklenice z 10.
6️⃣ Kolonizované a čerstvě připravené konzervy s obilím důkladně vytřete alkoholem. Zvláštní pozornost věnujte místu, kde se víko dotýká sklenice.
Příprava sklenic se sterilním zrnem pro inokulaci zrna na zrno
7️⃣ Otevřete sklenici mycelia a jednu z vašich nekolonizovaných sklenic. Umístěte část mycelia zrna do sterilního obilného substrátu. Zakryjte naočkovanou nádobu prodyšným víčkem filtru a odložte ji stranou. Víčka sklenic nevyžadují očkovací port, pouze prodyšný filtr pro výměnu plynů.
Přeneste zrno na zrno v SAB (stálý vzduchový box)
Přenos mycelia zrna do sterilního obilného substrátu
Opakujte postup s každou další nádobou. Snažte se to udělat co nejrychleji a dlouho se nevznášet nad otevřenou plechovkou!
Očkování zrno na zrno
❗️Rozdělte obilné mycelium (matečný louh) z jedné sklenice do 3-5-7 podobných sklenic. Podhoubí z jedné nádoby může být rozděleno do maximálně 10 nádob o stejném objemu.
❗️ Čím více zrnového mycelia se přenese, tím vyšší je šance na rychlou a úspěšnou kolonizaci nové části sterilního obilného substrátu.
Mycelium obilí můžete odstranit sterilní lžičkou nebo pomocí očkovací jehly. To lze provést, pokud je mycelium zrna velmi husté a nebylo možné jej rozbít ve sklenici. Pokuste se důkladně očistit lžičku lihem a očkovací jehlu lihem, aby nedošlo ke kontaminaci substrátu nesterilním nástrojem.
Očkování sterilního obilného substrátu myceliem zrna
8️⃣ Poté, co dokončíte přenos zrna, sklenicemi důkladně protřepejte, aby se zrno porostlé myceliem rovnoměrně rozprostřelo. Čím rovnoměrněji se šíří, tím rychleji banka dosáhne 100% kolonizace.
9️⃣ Vložte sklenice tmavé, suché a teplé místo (+27°..+29°С) ke kolonizaci – v inkubátoru. Po 1-2 týdnech (v závislosti na druhu houby) budou všechny sklenice s obilím zcela kolonizovány.
Sklenice s myceliem obilí v období kolonizace
Které zrno je účinnější pro přenos zrna na zrno?
❇️ Menší zrna (například proso) kolonizují substrát zrna rychleji při přenosu zrna na zrno díky většímu počtu vývojových bodů mycelia.
❇️ Jemnozrnný matečný louh je výhodnější a účinnější pro očkování zrna na zrno. Jedna plechovka kolonizovaného prosa tedy může účinně naočkovat 5-7 plechovek obilí. Zatímco jedna plechovka velké kukuřice bude rozdělena do ne více než 3-4 plechovek.
❇️ Vyčištěné zrno (proso, kroupy), i když úspěšně kolonizované myceliem, není tou nejlepší variantou pro přenos zrna na zrno.
Jak dlouho lze skladovat obilné mycelium?
Zrno zcela kolonizované myceliem lze skladovat v chladničce po dobu až 2-3 měsíců při teplotě ne nižší než +5°C (optimálně při +8°..+14°C), což dává pěstiteli ještě více možností pro organizování a plánování pěstování.
| 1. | Vstup |
| 2. | Co koupit na pěstování hub |
| 3. | Příprava suspenze spor |
| 4. | Výběr substrátu |
| 5. | Příprava podkladu |
| 6. | Příprava nádob na substrát |
| 7. | Sterilizace |
| 8. | Očkování |
| 9. | Sestavení inkubátoru vlastníma rukama |
| 10. | Pouzdro a houbové koláče |
| 11. | Studený šok |
| 12. | Sestavení skleníku, postavení dortů |
| 13. | Jak pěstovat houby v láhvi bez skleníku nebo monotube |
| 14. | Začátek plodování hub |
| 15. | Snímání otisků výtrusů |
| 16. | Sbíráme první úrodu. |
| 17. | Sušení a skladování plodin |
| 18. | Rehydratace dortů |
| 19. | 2. vlna plodování |
| 20. | 3. vlna plodování |
| 21. | 4. vlna plodování |
| 22. | 5. vlna plodování |
| 23. | 6. vlna plodování |
| 24. | Likvidace dortů |
| 25. | Shromažďování rostoucích statistik |
| 26. | Experimenty během procesu růstu |
| 27. | Rostoucí výsledky |
| 28. | Co je to překryvná vrstva a jak ji opravit |
| 29. | Houbové potraty |
| 30. | Metabolity hub |
| 31. | Infekce myceliem |
| 32. | Vaření. Vaření houbové čokolády |
| 33. | Mikrodávkovací kapsle |
| 34. | Mikrodávkování. Základní pravidla |
| 35. | Výlet: příprava, opatření |
| 36. | Bad trip: jak se chránit |
| 37. | Odvar z hub |
| 38. | Suspenze tekutého mycelia vs |
| Inokulace zrna do zrna | |
| 40. | Jak se vypořádat s plísní pavouků |
| 41. | Kmen Zlatý učitel |
| 42. | Kmen Pink Buffalo |
| 43. | Právní status |
| 44. | Panaeolus, Panaeolus |
