Jak odebrat krev telatům?

Účel studia:
Detekce provirové DNA viru bovinní leukémie izolované ze zvířecího biologického materiálu.

Metoda výzkumu:
PCR v reálném čase.

Formát výsledku: kvalitativní (pozitivní/negativní)

Druhy zvířat: pouze skot (skot)

Příprava na výzkum

Typy testovaného materiálu: 1. Krev s K3EDTA pro zvířata starší 14 dnů. 2. Parenchymální orgány (lymfatické uzliny, slezina) Pravidla pro odběr a uchovávání vzorků pro výzkum: 1. Doporučuje se odběr krve vakuovými systémy, uchovávání v chladničce po dobu 2 hodin při teplotě 8 °C až 2 °C C je přijatelné. 5. Z orgánů a tkání se vyříznou kusy o velikosti ne větší než 5 x 5 x 2 cm, každý orgán se umístí do samostatného zataveného sáčku a podepíše se. Orgány balené ve sáčcích od jednoho zvířete se vloží do společného sáčku a označí se identifikátorem zvířete. Doručeno do laboratoře do 1 hodin po odběru. Není-li možné tento požadavek dodržet, je vybraný materiál zmrazený a po XNUMX dni doručen zmrazený do laboratoře, rozmrazování během přepravy není povoleno.

Požadavky na biomateriál

CHARAKTERISTIKA ONEMOCNĚNÍ PŘÍČINA A PRŮBĚH ONEMOCNĚNÍ Leukémie skotu je chronické infekční onemocnění nádorového charakteru, které je asymptomatické nebo se projevuje jako lymfocytóza a zhoubné bujení buněk krvetvorných orgánů s poruchou zrání, mající za následek difúzní infiltraci orgánů tyto buňky nebo výskyt nádorů. Původcem bovinní leukémie je virus obsahující RNA z čeledi Retroviridae, klasifikovaný podle morfologických charakteristik jako savčí onkovirus typu C, jehož biotopem jsou lymfocyty. Klinické příznaky V současné době neexistují žádná plemena skotu, která by byla absolutně odolná vůči infekci virem bovinní leukémie a leukémie. Existují dvě formy klinického průběhu onemocnění: enzootické a sporadické. Sporadická leukémie je vzácná a ekonomicky málo významná. Postižena jsou mladá zvířata do tří let věku. Onemocnění se vyskytuje ve třech formách: juvenilní, thymická a kožní. Enzootická leukémie: Epizootický proces leukémie je komplexní nepřetržitý proces přenosu VLCRS z infikovaných na vnímavá zdravá zvířata. Existují dva způsoby přenosu viru: vertikální (nitroděložní) a horizontální (kontaktní). K infekci obvykle dochází horizontálně, to znamená v důsledku zavedení zdravých zvířat do stáda infikovaného BLV a ve zdravých stádech – zavlečením zvířat infikovaných virem leukémie. Horizontální cesta nevylučuje přenos viru přes plemenné býky jako možné zdroje přenosu leukemické infekce při volném připouštění krav a jalovic. Identifikace infikovaných plemeníků na farmách slouží jako lakmusový papírek indikující povinnou přítomnost virem infikovaných krav a jalovic ve stádě, protože je spolehlivě prokázáno, že pářením zdravých zvířat s býkem infikovaným virem leukémie může dojít k šíření infekce. Naopak při použití zdravého býka v nefunkční farmě se nakazí virem leukémie a stane se šiřitelem této infekce. Bylo zjištěno, že absence býků v moderních stádech vede k „nekonvenčním“ hrám mezi kravami a jalovicemi v říji. Vzájemné skákání vede u vzrušených zvířat často k poškození kůže na kořeni ocasu, temeni a hrudní kosti. Pokud je mezi třecími zvířaty nosič viru leukémie, je během lovu zajištěna infekce krví na rány a škrábance. Tento faktor horizontálního přenosu VLKRS moderní epizootologie leukémie nebere v úvahu. VLCR může být přenášen transplacentárně s infikovanými mateřskými lymfocyty díky schopnosti lymfocytů migrovat v mezibuněčném prostoru a překonat tak placentární bariéru. Podle některých zpráv se až 20 % telat infikovaných virem BLV od jejich matek může narodit infikovaných. Virus leukémie je přítomen v mlezivu a mléce infikovaných krav. Inokulace takového mléka nebo mleziva do telat a ovcí vyvolává u nich infekci. Vzhledem k tomu, že VLKRS se přenáší pouze lymfocytem, ​​mimo který nemůže existovat, jsou cestami přenosu lymfocytů nesoucích tento virus veškeré veterinární a zootechnické činnosti se zvířaty prováděné v rozporu s pravidly asepse, zejména umělá inseminace krav. a jalovic, odběry krevních vzorků pro diagnostické studie, hromadné očkování, rektální vyšetření, chirurgické ošetření kopyt, využití všeobecných porodnic pro infikované a neinfikované rodící ženy, prostřednictvím dojíren, zejména v případech dojení krav s latentním a latentním, zejména klinická mastitida, stejně jako v případě nestabilních parametrů v systému dojení, použití plemenných býků (pro volné připouštění) infikovaných virem leukémie. Lokalizace viru. Virus je lokalizován v lymfoidních buňkách různých orgánů, kde zůstává po celý život (přetrvává). V infikovaných lymfocytech ve formě proviru (neproduktivní stav) je virus chráněn před působením protilátek neutralizujících virus a může být přenesen na potomstvo při dělení buněk. Provirus může změnit expresi buněčných genů, což vede k jeho transformaci a rozvoji nádorového stadia leukémie. Stálým příznakem infekce je tvorba specifických protilátek. Zdrojem nákazy jsou nemocná zvířata. Patogen se přenáší se všemi sekrety a exkrety obsahujícími leukocyty infikované virem (krev, mléko, kolostrum, spermie, nosní a vaginální hlen, sliny). Nejčastěji se virus přenáší krví. Největší nebezpečí z hlediska šíření infekce představují zvířata s perzistující lymfocytózou, u kterých je podíl infikovaných lymfocytů v periferní krvi výrazně vyšší než u zvířat, která jsou infikovaná, ale nedosáhla hematologického stadia choroba. Hlavní cestou přenosu infekce v přirozených podmínkách jsou injekční jehly, chirurgické nástroje atd., kontaminované virem. atd. při provádění hygienických a veterinárních opatření. Kromě toho může být virus přenášen transplacentárně (chromozomální nebo extrachromozomální přenos) z matky na plod, nutričně prostřednictvím mléka a mleziva a také sexuálně prostřednictvím infikovaného spermatu.

Veterináři v posledních letech projevují stále větší zájem o moderní metody odběru krve hospodářských zvířat pomocí vakuových odběrových systémů krve. Ne všem specialistům se však podařilo získat z první ruky spolehlivé informace o vlastnostech a výhodách nové techniky a seznámit se s ní v praxi.

Dodnes je rozšířeným způsobem odběru krve zvířatům (zejména skotu) odběr z krční žíly nebo z ocasní žíly, ale také z krční žíly pomocí prokrvovacích (nebo injekčních) jehel a skleněných zkumavek (nikoli vakuových). ). Tato technika má však řadu vážných nevýhod:

1. Krev je odebírána jehlou na propouštění krve gravitací do otevřené zkumavky. To velmi často vede k potřísnění krve, a proto je u zvířat i lidí vysoké riziko infekce. Někteří lidé používají injekční stříkačky, ale to nevylučuje nutnost přenášet krev do otevřené zkumavky. Pokud nepotřebujete sérum, které se bude uvolňovat ve skleněné zkumavce (ale ne v plastové), ale plnou krev, pak je třeba ručně změřit objem krve potřebný pro výzkum a poté ručně přidat požadované množství reagencií (kde jsou také možné chyby v dávkování). Transfuze krve ze stříkačky do zkumavky navíc často vede k hemolýze, která zkresluje výsledky studií nebo je znemožňuje. Chybou je také odběr krve injekční stříkačkou a následná transfuze krve do vakuové zkumavky.
2. Krev odebraná gravitací do otevřené zkumavky ztrácí vlivem vnějšího prostředí na ni sterilitu, proto mohou být zkresleny výsledky laboratorních testů. Skleněné zkumavky jsou uzavřeny buď nesterilními pryžovými zátkami nebo vatovými tampony, což často vede k otevření zkumavky a rozlití krve.
3. Skleněné zkumavky se často rozbijí – proto je nutné nejen odstranit následky v podobě úlomků a rozlité krve, ale také znovu odebrat vzorek krve zvířeti.
4. Při odběru krve z krční žíly je nutné zvíře fixovat, to znamená zapojit do výkonu další personál s odpovídajícími náklady na práci, nervy, čas a finance.
5. Tuhá fixace, stejně jako bolest při odběru krve silnostěnnými jehlami na prokrvení velkého průměru, vyvolává u zvířat stres. U skotu to vede k nevyhnutelnému poklesu dojivosti z 0,3 na 1 litr denně po dobu několika dní. Na 1000 hlav mohou ztráty z poklesu produkce mléka činit až 20–25 tisíc rublů (mimochodem, tato částka sama o sobě výrazně převyšuje náklady na vakuové systémy odběru krve potřebné k odběru krve z 1000 hlav).
6. Hrubá fixace vede k masivní reinfekci dříve zdravých zvířat leukémií prostřednictvím poranění nosní sliznice.

Vakuové systémy odběru žilní krve mají výhody, které jsou více než dostatečné k tomu, aby navždy zapomněli na předchozí metodu odběru krve.

Vakuový systém se skládá ze tří částí:

1. Oboustranná jehla – závitová nebo automatická (různých délek a průměrů).
2. Držák jehly je závitový nebo automatický.
3. Vakuová zkumavka.

Zkumavka je sterilní, uzavřená, vyrobená z nerozbitného, ​​biologicky inertního plastu (polyethylentereftalát), což neovlivňuje výsledky výzkumu.

Zkumavky obsahují činidlo nastříkané na stěny:

• k získání séra se používá aktivátor koagulace (silikonový povlak, aktivace tvorby krevní sraženiny a uvolňování séra);
• K získání plné krve se používá antikoagulant K2 EDTA (Trilon B).

Není třeba ručně přidávat činidla do zkumavky – po odebrání krve lze vakuovou zkumavku (s uzávěrem nebo bez něj) odstředit a umístit do analyzátoru.

Zkumavky mohou mít různé vakuové objemy (a tedy i objem odebrané krve) – od 2 do 10 ml. Nejoblíbenější objemy jsou 9-10 ml (pro skot, prasata, koně). Pro malá zvířata můžete použít zkumavky 2, 3, 4 ml.

Výhody vakuových systémů ve srovnání s běžnými jehlami a trubičkami:

1. Oboustranné laserem broušené jehly snadno vniknou do žíly, aniž by způsobovaly silnou bolest. Pokud se používají jehly na krev nebo injekční jehly o průměru 1,2 mm (18G), pak lze použít oboustranné jehly vakuových systémů o průměru 0,9 mm (20G) – protože tyto jehly jsou tenkostěnné, pak s menším vnější průměr jehly, její vnitřní průměr není menší než propustnost jehel o tloušťce 1,2 mm. Vnější a vnitřní povrch jehly je ošetřen silikonem, takže krev volně proudí do zkumavky, aniž by došlo k trombóze jehly. Pryžový ventil na distálním konci jehly zabraňuje vystříknutí krve, když je jehla v žíle bez zkumavky. Díky tomu můžete odebrat krev do několika zkumavek bez vyjmutí jehly ze žíly – jedna zkumavka se vyjme z držáku jehly a druhá se zasune pro odběr nového vzorku krve (pokud je nutné odebrat krev pro několik typů výzkumu najednou).
2. Při odběru vzorku je zachována těsnost systému, krev zůstává sterilní a nestříká, což vylučuje možnost křížové infekce.
3. Vakuová trubice je vyrobena z nerozbitného materiálu. Není potřeba sbírat rozbité skleněné zkumavky nebo uklízet rozlitou (případně infikovanou) krev.
4. Doba srážení krve in vitro je snížena. Díky aktivátoru srážení (silikonový povlak) se sérum uvolní za 20-30 minut.
5. Vzorek krve je odebrán do vakuové zkumavky, v ní transportován do laboratoře, v ní odstředěn a vyšetřen v analyzátoru. To znamená, že není potřeba převádět krev z jedné zkumavky do druhé.

Výhody odběru krve pomocí vakuových systémů:

1. Krev je odebrána z ocasní žíly dobytku jedním specialistou bez fixace zvířete. Jedná se o nejjednodušší a nejúčinnější metodu, i když krev lze odebrat z jiných žil.
2. Absence stresu u krávy eliminuje pokles produkce mléka, což umožňuje značnou úsporu peněz. Zranění veterinářů v důsledku stávek zvířat jsou snížena nebo zcela odstraněna.
3. Odběr krve jedné krávě včetně přípravy vakuového systému trvá asi 30 sekund. Veterinář tak může během jednoho dne samostatně, bez asistentů, odebrat vzorky krve stádu skotu o 300–500 kusech. Zkrácení času, který veterináři stráví v oblastech, kde se zvířata nacházejí, umožňuje zvířatům v klidu jíst potravu a odpočívat mezi dojeními.

Při odběru krve je oboustranná jehla upevněna v držáku jehly, zavedena do žíly, poté je do držáku jehly vložena vakuová trubice tak, že distální konec jehly prochází membránou uzávěru, a krev pod vlivem vakua naplní samotnou zkumavku.

Po naplnění krví se zkumavka vyjme z držáku jehly a držák jehly s jehlou se vyjme ze žíly. Jehla se vyhodí. Zkumavka se opatrně 2-3x převrátí (pro lepší promíchání krve a činidla) a umístí se do stojanu, připravena k transportu do laboratoře, centrifugaci a vyšetření v analyzátoru.

JSC Firma Domen nabízí vakuové systémy Venosafe TERUMO (vyrobeno v Belgii) a Bodywin (vyrobeno v Číně).

Mezi různými systémy odběru krve (včetně těch, které do Ruska dodávají jiné společnosti) nejsou žádné zásadní rozdíly. TERUMO (Belgie) je však jediným výrobcem na světě, který vyrábí oboustranné jehly pro vakuové systémy nejen se závitovým připojením s držákem jehly, ale i s automatickým (bezzávitovým). Tuto charakteristickou vlastnost velmi oceňují veterináři, kteří se potýkají s potřebou odebrat krev několika desítkám či stovkám zvířat v jeden den jedním nebo dvěma lidmi.

Při použití jehel s nití je nutné počítat s dodatečnou časovou a personální náročností, k vyjmutí jehly s nití z držáku jehly bez porušení bezpečnostních opatření potřebujete speciální nádobu na likvidaci jehel, vybavenou konektor ve víčku, kam se zasune jehla a otočením držáku se odšroubuje a spadne do nádobky . Takové nádoby jsou poměrně drahé a málokdo je používá. Specialisté jsou proto nuceni vyjmout použitou jehlu se závitem z držáku jehly, nasadit na ni ochranné víčko a ručně ji odšroubovat a vhodit do nějaké nádoby. Pokud mluvíme o odběru krve z několika desítek hlav, pak to nezpůsobuje žádné zvláštní problémy, pokud porušení bezpečnostních předpisů při takových manipulacích pro někoho není problém. Ale při odběru krve z několika desítek či stovek hlav (zejména u starších veterinářů) dochází nejen k výrazným ztrátám času při zašroubování a vyšroubování jehel, ale také k přetažení paží (šlach). Navíc, co je nejnepříjemnější a nejnebezpečnější, je velmi vysoká pravděpodobnost poranění potenciálně infikovanou použitou jehlou, když se na ni opět nasadí krytka pro následné vyšroubování z držáku jehly. Proto je použití automatických jehel a držáků jehel v praxi výhodnější a bezpečnější než závitové, i když automatické jsou o něco dražší. Automatické jehly stojí jen o 50 kopejek více než jehly se závitem (výrobce TERUMO). Rozdíl v ceně automatických a závitových držáků jehel je na první pohled poměrně velký, ale při přepočtu nákladů na držák na jeden odběr krve se stává zcela nepodstatným – automatické držáky jehel s mechanismem resetování jehly lze použít až 500,- krát, podrobeny vhodnému ošetření po každém použití. To znamená, že náklady na držák jehly v přepočtu na 1 odběr krve = 3-5 kopejek.

Automatické (beznitové) jehly a držáky jehel se velmi snadno používají. Jehla se jednoduše zacvakne do držáku a po použití se stisknutím 2 tlačítek vysype do libovolné nádoby na likvidaci jehly (i nespecializované). Zde můžete zacvaknout novou jehlu do držáku jehly a stejně rychle ji po dalším použití znovu nastavit. Držák jehly při správném použití nepřichází do styku s krví, takže v praxi nemůže být článkem přenosu infekce. Aby však byly splněny hygienické normy, musí být každý držák jehly po použití podroben vhodné dezinfekci.

Kromě dostupnosti automatických jehel a držáků jehel je výhodou Domen Firm CJSC jako dodavatele vakuových systémů, že v našem sortimentu máme vždy skladem nejen oboustranné jehly dlouhé jeden a půl palce (1 1/ 2″ = 38-40 mm), ale také 1 palec na délku (1″ = 25 mm). Při odběru krve z krční žíly skotu a prasat se používají jehly dlouhé 40 mm a při odběru krve z ocasní žíly skotu lze použít jehly 40 mm, ale mnohem pohodlnější jsou 25 mm.

Automatické jehly a držáky jehel Terumo (Belgie) lze používat společně se zkumavkami jiných výrobců – všechny jsou vyrobeny podle stejných norem – pokud tedy potřebujete ušetřit, můžete si za ně pořídit zkumavky Bodivin (Čína) .

CJSC Firma Domen, St. Petersburg, dodává tyto produkty přímo do Ruska od roku 2000. Jsme připraveni dodat zboží, které je trvale dostupné v našich skladech v Petrohradě v co nejkratším čase, a to jak na základě přímých zakázek, tak prostřednictvím systému státních zakázek (aukce, nabídky). Technika odběru krve je popsána ve „Sbírce směrnic pro použití vakuových odběrových systémů krve ve veterinární praxi“, vydané naší společností (na Vaši žádost zašleme elektronicky). Kontaktujte nás telefonicky: +7(812)327-75-85.

• 02.01.2024/2023/XNUMX V roce XNUMX sklidili zemědělci rekordní sklizeň sóji
• 14.01.2023 Poprvé v Rusku porodila klonovaná kráva potomstvo
• 13.01.2023 Můžete získat půjčku až 700 tisíc rublů od Ruské zemědělské banky. pro domácí kutily
• 12.01.2023 Čuvašská zemědělská společnost “Oldeevskaya” zahájila výrobu entomofágů
• 11.01.2023 Společnost Pegas-Agro zvyšuje výrobní kapacitu
• 10.01.2023/XNUMX/XNUMX Vyhlídky rozvoje chovu dojnic v Baškortostánu
• 10.01.2023/XNUMX/XNUMX Tatarstán stanovil historické maximum pro produkci mléka
• 09.01.2023/2022/13 V roce XNUMX zakoupili zemědělci z Baškortostánu vybavení v hodnotě téměř XNUMX miliard rublů.
• 08.01.2023/XNUMX/XNUMX Zájem o zemědělskou spolupráci roste v regionu Penza
• 07.01.2023/XNUMX/XNUMX PSK “Olenevod” a LLC “Intinskoye” postaví nové ohrady pro jeleny